Plantas Carnívoras

Muitas pessoas tem me perguntado sobre este tema. Não sou conhecedor, apenas pesquisei alguma coisa na internet e vim compartilhar com vocês.

GOSTARÍAMOS DE DEIXAR BEM CLARO QUE NEM EU NEM ESTE FÓRUM BEM COMO NOSSOS MODERADORES/ADMINISTRADORES NOS RESPONSABILIZAMOS POR QUAISQUER DANOS MATERIAIS E/OU FÍSICOS EVENTUALMENTE GERADOS PELA PRÁTICA INAPROPRIADA DOS PASSOS EXPLICADOS NESTE CONTEÚDO.

Abaixo segue resumo do que significa o tema:



Cultura de tecidos, também conhecida como micropropagação, é um método de propagação utilizado para produção de plantas em condições estéreis. Este método usa explantes de plantas (partes ou cortes da planta) e as sementes que tenham sido esterilizadas antes de serem colocados em recipientes com meio de cultura (geralmente um gel), que tem alguns nutrientes adicionados. Os explantes, sementes, recipientes e meio de cultura devem ser esterilizados, e este método(se bem sucedido) impede que qualquer tecido vegetal, explante inteiro ou semente , seja infectado por um microorganismo de qualquer tipo resultando no apodrecimento durante o tempo em que essas partes da planta necessitam para se tornar enraizadas ou para se multiplicar.
Muitos tipos de sementes germinadas nestas condições tendem a crescer muito rápido em comparação com as semeadas em ambiente externo. Usando tecidos de planta, é possível propagar cópias exatas da planta doadora. Isto é extremamente útil para as plantas que geneticamente têm características desejáveis porque pode-se criar muitos clones de uma determinada planta muito mais rápido do que os métodos tradicionais, como a propagação de estacas ou divisões.
O meio estéril de nutrientes geralmente contém uma solução de nutrientes (tipicamente sais e vitaminas), sacarose (açúcar), hormônios (opcional para geração de calos, enraizamento...etc), antibióticos (opcional), e um agente de solidificação ou gelificantes tal como o agar (um produto gerado a partir de algas).
Quatro estágios de cultura de tecidos vegetais foram definidos por um pioneiro no campo científico, Toshio
Murashige, professor emérito da Universidade da Califórnia em Riverside:

Estágio I - Estabelecimento de uma cultura (estéril) asséptica.
Estágio II - A multiplicação de propágulos ( propágulo é qualquer parte de uma planta usado para tornar-se novas plantas, seria a evolução do explante).
Estágio III - Preparação de propágulos para a transferência bem-sucedida para o solo (enraizamento e “endurecimento").
Estágio IV - Estabelecimento no solo (ou outro substrato adequado).

A principal diferença entre cultura de tecidos e propagação feita por estacas, divisões ou sementes é que as plantas crescem mais rápido (o meio gel nutritivo ajuda) e pode-se multiplicá-los rapidamente, dando-lhes os hormônios adequados e dividindo-os regularmente. Em teoria, você pode criar um número infinito de plantas a partir de apenas um pedaço de tecido, e muitas plantas em um período relativamente curto de tempo. Abaixo está uma foto, cortesia de Jens Brettschneider, mostrando a diferença na taxa de crescimento e tamanho da planta obtida a partir de sementes e da planta gerada na cultura de tecidos,ambos processos começaram ao mesmo tempo.
À esquerda em cultura de tecidos, e à direita na mídia tradicional semeando em substrato.

[img]http://img708.imageshack.us/img708/4247 ... acaotc.jpg[/img]


Conforme dito anteriormente, para propagar uma planta em meio estéril é necessário que se siga alguns passos/estágios que se resumem na seguinte configuração:

1- Preparação do meio de cultura
1.1- Meio de estabelecimento e multplicação
1.2- Meio de enraizamento
2- Esterilização dos explantes
3- Introdução in vitro
4- Introdução ex vitro
Antes de começarmos qualquer atividade relacionada ao tema do tópico, precisamos garantir que tanto os meios,ferramentas e ambiente esteja o mais limpos possíveis. Digo limpo em relação à ausência de quaisquer agentes contaminantes como esporos de mofo, bactérias...etc.
O equipamento mais usual nesse ramo é a autoclave pois ele garante uma esterilização mais eficaz pois consegue eliminar todos os agentes causadores de contaminação porque gera um ambiente com 121°C na temperatura e 1kgf/cm² de pressão.
Deve-se esterilizar tudo o que for possível afim de se diminuir o risco de perda da nossa cultura. Atentem-se para o fato de alguns objetos não serem autoclaváveis!
Uma opção mais barata para esse processo é o uso de panela de pressão e microondas sendo que o último não garante uma esterilização tão precisa assim. É extremamente perigoso ligar com ambos os equipamentos portanto sugiro que sejam manuseados por pessoas realmente capacitadas.

O meio de cultura nada mais é do que um solo artificial com textura de gel no qual o explante ou a planta já formada ficará introduzida afim de se garantir seu desenvolvimento.
É no meio de cultura onde a planta absorverá todos os nutrientes necessários para sua sobrevivência(excluindo a luz é claro).

O meio mais famoso entre os propagadores é o MS(Murashige & Skoog) acrescido de vitaminas. Em resumo, são sais que misturados ao meio promovem a estrutura de absorção adequada da qual a planta necessitará.
Para se obter 1 litro de meio MS temos que seguir os passos abaixo:

1- Encher um recipiente de 1 litro ou 1 com 900mL de água destilada.
2- Adicionar meio MS(geralmente usa-se a proporção de 1:2 ou 1:3 desse meio ao invés de usar o pacote todo por litro).
3- Injetar 1 ml de PPM(plant preservative moisture) se desejar, eu recomendo essa adição devido as propriedades de "esterilização" desse produto.
4- Adicione o corante (opcional). Serve apenas para dar cor ao meio e facilitar sua identificação futura.
5- Coloque 30g de açúcar branco.
6- Adicionar hormônios(opcional) de acordo com a necessidade do projeto.
7- Agite bem e em seguida preenche com mais água até a marca de 1 litro, agite de novo.
8- Teste o pH da mistura, o mesmo deve estar entre 5,6 e 5,8 preferencialmente e, pra grande parte das carnívoras. Caso o ph não esteja adequado altere-o com auxílio de acidificantes / alcalinizantes.
9- Adicione o agente gelificante, geralmente usa-se de 6g à 8g de agar por litro. Algumas pessoas não depositam o agente gelificante antes do processo de aquecimento.
10- Você pode distribuir o meio em potinhos menores tipo aqueles usados em papinhas de bebê, com 35ml - 50ml por pote antes do aquecimento ou aquecer tudo junto no recipiente de 1 litro mas saiba que após o aquecimento recomenda-se, de qualquer forma, distribuir o meio em potes menores. Para aquecer usa-se uma autoclave(que é um equipamento caro) mas existem pessoas que fazem isso em casa com auxilio de um forno microondas e/ou uma panela de pressão, eu não recomendo pois é perigoso. Deve-se tapar os potes para evitar a evaporação do meio durante o aquecimento.
11- Após o aquecimento, se você já havia despejado o agente gelificante, basta apenas tapar colocar os potinhos num local extremamente limpo e esperar que esfriem. Recomenda-se deixá-los semi-abertos para a saída dos vapores evitando com isso a formação de água sobre o meio. Quando já estiverem frios, nota-se que o meio passou do estado líquido para o gel.

Sempre tenha em vista que a contaminação do meio é muito fácil de acontecer, portanto mantenha tudo(me refiro as ferramentas e equipamentos bem como o local de estocagem) sempre limpo.

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Primeiramente peço desculpas pela demora mas estive fazendo um grande trabalho sobre esterilização baseado em algumas teses/trabalhos nacionais e estrangeiros.
Quando estava quase tudo pronto eu fui pedir autorização para publicá-los em nosso fórum mas infelizmente isso me foi negado porque lamentavelmente algumas pessoas não partilham o conhecimento com medo de perder o prestígio de serem as poucas que detém o eficaz "passo-a-passo" da cultura de tecidos.

Sendo assim, vou dividir o tema de esterilização em muitas partes, relatando o procedimento usado numa determinada ocasião.

OS PROCEDIMENTOS QUE SEGUEM CONSISTEM EM PARTES EXTRAÍDAS DE LIVROS E ARTIGOS(NACIONAIS E/OU ESTRANGEIROS) DA INTERNET, QUALQUER INFORMAÇÃO FAMILIAR EM RELAÇÃO AO CONTEÚDO TERÁ SIDO MERA COINCIDÊNCIA.
FONTES: GOOGLE/CPUK/ICPS

Esterilização de Explantes - Drosera Spathulata

Neste processo de esterilização foi usado um exemplar cultivado em estufa da D. spatulata (> 2,5 cm de diâmetro) como explantes iniciais.
Antes de mais nada, providencie bastante água destilada(é mais seguro sempre ter entre 1 e 3 litros em casa) pois você vai precisar!!!
Vou listar os materiais usados no processo e como obtê-los:

1)Álcool etílico à 70% >>> É mais eficaz na higienização e remoção de bactérias do que o álcool comum ( 92% ). Pode-se comprá-lo diretamente ou diluir o álcool mais comum 92,8ºGL na seguinte proporção: 760ml de álcool + 240ml de água destilada. Não esqueça de rotular o frasco(Álcool etílico 70%) pra uso futuro.

2)Hipoclorito de sódio 3%(água sanitária) >>> Para fazer 100ml de solução misture 3ml de água sanitária + 97ml de água destilada. Para fazer meio litro misture 15ml de água sanitária + 485ml de água destilada. Para fazer 1 litro misture 30ml de água sanitária + 970ml de água destilada.

3)Hipoclorito de sódio 2%(água sanitária) >>> Para fazer 100ml de solução misture 2ml de água sanitária + 98ml de água destilada. Para fazer meio litro misture 10ml de água sanitária + 490ml de água destilada. Para fazer 1 litro misture 20ml de água sanitária + 980ml de água destilada.

4)Hipoclorito de sódio 1,5%(água sanitária) >>> Para fazer 100ml de solução misture 1,5ml de água sanitária + 98,5ml de água destilada. Para fazer meio litro misture 7,5ml de água sanitária + 492,5ml de água destilada. Para fazer 1 litro misture 15ml de água sanitária + 985ml de água destilada.

5)Hipoclorito de sódio 1%(água sanitária) >>> Para fazer 100ml de solução misture 1ml de água sanitária + 99ml de água destilada. Para fazer meio litro misture 5ml de água sanitária + 495ml de água destilada. Para fazer 1 litro misture 10ml de água sanitária + 990ml de água destilada.

6)Hipoclorito de sódio 0,5%(água sanitária) >>> Para fazer 100ml de solução misture 0,5ml de água sanitária + 99,5ml de água destilada. Para fazer meio litro misture 2,5ml de água sanitária + 497,5ml de água destilada. Para fazer 1 litro misture 5ml de água sanitária + 995ml de água destilada.

7)H2O2 à 6%(água oxigenada) >>> Providencie frascos de 100ml (20 volumes = 6%).

8)H2O2 à 3%(água oxigenada) >>> Providencie frascos de 100ml (10 volumes = 3%).

Vá ao seu jardim carnívoro e escolha uma planta bem saudável.
Extraia folhas de 4 a 6 mm de comprimento e bem-desenvolvidas(geralmente se usa um bisturi para a extração).
Com todos os produtos prontos, siga o procedimento abaixo:

1)Mergulhe o explante em álcool à 70% por 5 segundos. Lave-o em água destilada por 3 minutos.
2)Mergulhe o explante em água sanitária à 3% por 5 minutos. Lave-o em água destilada por 3 minutos.
3)Mergulhe o explante em álcool à 70% por 5 segundos. Lave-o em água destilada por 3 minutos.
4)Mergulhe o explante em água sanitária à 2% por 5 minutos. Lave-o em água destilada por 3 minutos.
5)Mergulhe o explante em água sanitária à 1,5% por 5 minutos. Lave-o em água destilada por 3 minutos.
6)Mergulhe o explante em água sanitária à 1% por 5 minutos. Lave-o em água destilada por 3 minutos.
7)Mergulhe o explante em água sanitária à 0,5% por 7 minutos. Lave-o em água destilada por 3 minutos.
8)Mergulhe o explante em água oxigenada à 6% por 15 minutos. Lave-o em água destilada por 3 minutos.
9)Mergulhe o explante em água oxigenada à 3% por 20 minutos. Lave-o em água destilada por 3 minutos.

Na última lavagem recomenda-se já estar com o frasco+explante dentro da capela de fluxo laminar, após a lavagem pegue o tecido com o auxílio de uma pinça e coloque-o sobre o gel que você aprendeu a preparar em outro método e tampe o frasco. Recomenda-se o uso de filme plástico para vedar bem o frasco.


Por enquanto é isso!

Abraços

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Para se garantir o sucesso de sua cultura será necessário que você providencie um ambiente extremamente limpo para seus frascos.
Propagadores profissionais geralmente possuem uma sala somente dedicada ao estoque. Nesta sala existem diversas estantes com luminárias em todas as prateleiras onde ficam os frascos. Além disso, a assepsia do local é feita diária ou semanalmente para evitar contaminações.

Você deverá usar sua criatividade para manter sua cultura, eu usei um velho projeto aqui do fórum e através de algumas adaptações pude deixá-lo mais adequado para receber os frascos/tubos.

Usei apenas um andar da estufante para começar, 2 lampadas luz do dia de 20 a 40w já servem. você deve fechar tudo com plastico transparente de modo que as lampadas nao fiquem no mesmo ambiente que os frascos para nao aquecerem demais.
Coloquei uma ventoinha de pc para refrigerar o conjunto reator + lampadas.
A altura mínima entre lampadas e frascos começa a partir de 30cm, se você quiser aumentar o rendimento de sua iluminação, basta colocar papel alumínio nas paredes da estufante.
Nem preciso dizer que TUDO deve estar extremamente limpo o tempo todo e sempre que possível, borrife álcool e com um pano limpe bem as superfícies.

Melhorias virão...

Abraços

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